Th1/Th2/Th17细胞因子检测应用方案
来源：时间：2014-11-14
建议检测指标
Th1/Th2/Th3/Tfh/Th17/Treg相关因子
IFN-γ、IL-2、IL-4、 IL-5、IL-6、IL-7、IL-10/CSIF、IL-12/IL-23 p40、IL-12 p70、IL-13、IL-17A/CTLA-8、IL-17F/ML-1、IL-21、IL-22/IL-TIF、TGF-beta 1、TSLP
检测目的： 检测免疫状态，观察疾病进程，判断预后，辅助诊断，药效评价等。
应用举例：
药效评价试验：
用小鼠的腹腔巨噬细胞，经炎症激发因子（LPS）诱导建立了巨噬细胞炎症模型。在该模型中可通过测定被筛选化合物抑制IL-2，IL-4，IL-6，IL-10，IL-17A，TNFα，IFN-γ各细胞药因子表达的程度来评价化合物的抗炎活性。本试验所建立的药物筛选模型是一种灵敏、高效、可靠、适于高通量抗炎药物筛选的细胞模型。
试验方法：
1．样本制备：接种106小鼠巨噬细胞至每孔培养，分为空白组和LPS实验组； LPS实验组细胞用LPS刺激24小时后， 分别加入不同浓度（分别为10-5 mg/ml, 10-6mg/ml, 10-7 mg/ml）的1# 和2#号药物，继续培养48小时，收集各细胞培养上清15000 RPM，离心10min，取上清-80保存备用。
2. 检测步骤： 用 Ainplex ?MouseTh1/Th2/Th17 7-plex检测试剂盒进行检测。加入45ul 捕获微球混悬液入96孔板，分别加入标准品和稀释样本45ul，室温避光孵育1h，洗涤后加入25ul生物素偶联的检测抗体，室温避光孵育30min，洗涤后加入25ul链霉亲和素标记的PE工作液，洗涤后加入 150 ul 洗液，重新悬浮微球。使用流式细胞仪上机检测。
3. 结果分析：用FCAP Array软件分析各个因子检测数据，分析IL-2，IL-4，IL-6，IL-10，IL-17A，TNFα，IFN-γ各因子变化趋势，筛选炎症抑制效果理想药物及其浓度。
各样本中不同细胞因子含量结果图
结论：
1.小鼠巨噬细胞用LPS刺激后IL-2，IL-4，IL-6，IL-10，IL-17A，TNFα，IFN-γ均有一定程度的增高，其中TNF-α，IL-6，IL-10，IFN-γ较为明显。
2.1#药物在10-5,10-6浓度时，对各因子均有明显抑制作用，在10-7浓度时抑制作用明显降低。
3.2#药物在10-5浓度时，对各因子均有明显抑制作用，在10-6浓度时抑制作用明显降低，10-7浓度没有抑制作用。
4.总体结果1#药物效果明显比2#药物要好，即抗炎效果更有效。
推荐产品及货号
PN | Name | Description | Size |
C190010 | Human Th1/Th2 10-plex | IFNgamma, IL-1beta, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12p70, TNFalpha | 96 T |
C191107 | Human Th1/Th2/Th17 7-plex | IFN-gamma,IL-10/CSIF,IL-17A/CTLA-8,IL-2,IL-4,IL-6,TNF-alpha | 96 T |
C191114 | HumanTh1/Th2/Th17 14-plex | IFNgamma, IL-1beta, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12p70, IL-17A, IL-17F, IL-22, TNFalpha, TNFbeta | 96 T |
C191118 | HumanTh1/Th2/Th1718-plex | GM-CSF, IFNgamma, IL-1beta, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-8, IL-9, IL-10, IL-12p70, IL-17A, IL-17F, IL-22, IL-33, TNFalpha, TNFbeta, TSLP | 96 T |
C281107 | Mouse Th1/Th2/Th17 7-plex | IFN-gamma,IL-10/CSIF,IL-17A/CTLA-8,IL-2,IL-4,IL-6,TNF-alpha | 96 T |
C281114 | MouseTh1/Th2/Th17 14-plex | IFNgamma, IL-1alpha, IL-1beta, IL-2 , IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, IL-12p70, IL-13, IL-17A, IL-21, IL-22 and TNFalpha | 96 T |
C281118 | MouseTh1/Th2/Th17 18-plex | GM-CSF, IFNgamma, IL-1alpha, IL-1beta, IL-2 , IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, IL-12p70, IL-13, IL-17A, IL-21, IL-22, IL-23, KC, TNFalpha and TSLP | 96 T |
C281116 | MouseTh1/Th2/Th17 16-plex | GM-CSF, IFNgamma, IL-1alpha, IL-1beta, IL-2 , IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, IL-12p70, IL-13, IL-17A, IL-21, IL-23, KC, TNFalpha | 96 T |
C371107 | Rat Th1/Th2/Th17 7-plex | IFN-gamma,IL-10/CSIF,IL-17A/CTLA-8,IL-2,IL-4,IL-6,TNF-alpha | 96 T |
参考文献：
[1]Bettelli E, Carrier Y, Gao W,et a1.Reciprocal developmental pathways for thegeneration of pathogenic effector Th17 and regulatory T cells．Nature，2006，441(7090)：235-238.
[2]Chen Z，Lin F，Gao Y，et a1.FOXP3 and RORrt：transcriptional regulation of Treg and Th17.IntImmunopharmacol，2011，11(5)：536-542.
[3]Usui T.Transcription factors that regulate helper T celldifferen-tiation.Nihon Rinsho Meneki Gakkai Kaishi，2007，30(6):4l9-427.
[4]Hartmann P,Plum G.Immunological defense mechanisms in tuberculosis andMAC-infection.Diagn Microbiol Dis,1999,34:147-152.
[5]Appelberg R. Protective role of interferon gamma,tumor necrosis factor alphaand interleukin-6 in mycobacterium tuberculosis and M.aviuminfections.Immunobiology，1994,191(4-5):520.
详细信息请点击：http://www.quantobio.com/Home/Tpl/Public/Uploads/attach/5466f11eb7937.pdf
